影響ELISA試劑盒實驗的因素有哪些
更新時間:2021-11-25 點擊次數:1117次
ELISA試劑盒又被稱為即酶聯免疫法。上海酶聯生物ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點,并具有操作簡潔、無放射性危害的優點,因此多年來廣泛應用于各高校、學院和機構的試驗室中。
上海酶聯生物通過幾年的試驗調查,得出結論影響ELISA試驗的要素有如下三方面:
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價下降或失活,成果不易判別。再有ELISA試劑盒靈敏度高,對雜質的反響靈敏度也高,試驗中空白對照OD值偏高或假陽性;
2、酶結合物濃度過高,也會導致OD值假性增高。
二、試驗儀器
1、加樣器是否通過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的功能不好,吸取樣品不,會使成果忽高忽低;
2、每次洗板前,應查看洗板機針孔有無阻塞。
三、ELISA試劑盒操作
1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后運用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,避免形成試驗成果假性下降;
2、加樣時留意勿觸及包被板底部,避免擦傷包被物使抗體(抗原)掉落而影響試驗成果的精確性;
3、洗刷不充分,會使成果假性增高,過分洗刷呈假陰性;
4、比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬天板從37℃水浴箱取出時,底部留有水汽,應將板底擦干后進行比色,水汽或孔內氣泡也會使OD值升高;
5、抗原與抗體反響達到*平衡,依賴于溫度與時刻。溫度高于45℃易引起失活及符號物掉落,溫度低于4℃,影響反響速度。
由于ELISA試劑盒試驗的影響要素較多,我們在實踐工作中必須操作規范、仔細,避免和排除各種要素的影響,使之得到精確可靠的查驗成果。