ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在實驗中得到了廣泛應用,然而新手們面對各種各樣、動則上千種的ELISA試劑盒,內心應該是崩潰的。各種廠家、品牌,各種種屬,各種參數,琳瑯滿目,質量良莠不齊,如何浪里淘金,選擇既符合研究需求,又品質上乘的 ELISA 試劑盒呢?今天教教大家如何正確找到合適的ELISA試劑盒。
1.要明確樣本類型
不同廠家驗證樣本類型不同,即使同一廠家不同試劑盒,其驗證樣本類型也不盡相同。特別是復雜的血漿樣本,根據樣本處理方式的差異,分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿,因此購買前需仔細核對。
2.要會預測自己的目標因子的濃度
一般來說,待測因子可以根據經驗或資料獲得參考的檢測范圍,且正常人與疾病狀態存在差異。如熱門炎癥因子 IL-6,正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL,病人會顯著增高,CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。因而,必要時進行樣本的稀釋及選擇合適檢測范圍的試劑盒極其重要。若濃度太低,可選擇高敏試劑盒;若不確定待測濃度或樣本間濃度差異較大,建議使用檢測動態范圍更寬的化學發光法ELISA試劑盒。如同樣為 IL-6 ELISA 試劑盒,各類型檢測范圍差異較大,需要根據實際情況選擇合適的試劑盒。
3.檢查試劑盒進行過哪些質控
質控數據在說明書中即可找到,在購買前檢查試劑盒是否進行過嚴格的質控實驗,包括批次內(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實驗、線性稀釋實驗及交叉反應測試等,每個數據好都看一下,確保結果重現性及準確性。
4.確定需檢測的因子數量
如果待測因子超過 5 個,且樣本量較小時,單因子 ELISA 檢測方法并不是。建議考慮多因子檢測方法,如固相芯片(樣本數量一般 5 個以內,檢測指標可達上百個)及 Luminex 液相芯片方法(檢測樣本多達 80 個,檢測指標多達 50 個)或微流控 ELISA 檢測系統 Ella??晒澕s樣本及時間成本,也可保證檢測結果準確。
5.預算評估
預算往往是大家優先考慮的,實際上,不能夠一味講究產品價格,更需要考慮性價比。生物學是極其嚴謹的科學,一致性的實驗結果是基金、文章等評審過程中的因素,即使低廉的價格,不能夠重現結果,也是資源的另一種浪費。
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