你們細胞是怎么凍存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小時,-20度冰箱半小時,然后轉移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1個月后,細胞復蘇就感覺狀態不太好了!!
做實驗前要先學會凍存,以備自己在后面的實驗中能保持同一來源、穩定可靠的細胞,且可減少污染或其它不利影響。
影響凍存細胞活性的因素
1、細胞凍存保護劑:常用的有二甲基亞砜(DMSO)和甘油,常用的濃度為5%-10%(90%小牛血清)。DMSO對二倍體細胞的毒性較甘油小。
2、細胞懸液的凍結速度:慢凍時冰凍在細胞外形成,因此不致損害細胞。多數細胞以每分鐘下降1℃的速度,降至-20℃凍結。均可獲得滿意效果。
3、保存溫度:液氮罐,可達到-196℃,此時所有的物理化學活動均降至zui低限度,以保證細胞長期保存。
4、復蘇:急速融化復蘇可防止損害細胞。凍結細胞從液氮中取出后,應立即放入37℃~43℃的水浴中,30秒至一分鐘內融化。