產品時間:2019-04-11
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中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)
細胞介紹
CHO 細胞以人 CTLA-4 基因細胞外結構域序列和人 IgCgamma1 的絞鏈區,CH2 和CH#區序列的融合結構轉染,構建了這株細胞。它們表達融合蛋白(CTLA4Ig)。
細胞特性
1)來源:中國倉鼠卵巢
2)形態 :可貼壁生長(上皮細胞樣),也可懸浮生長(圓球形)
3)含量:>1x10 6 個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格:T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝運輸和保存:使用含有胎牛血清的 2ml 凍存管發送存活細胞。收到細胞后,可在 1000RPM,常溫條件下,離心 5min 后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基后至10cm 培養皿或者 T25 培養瓶中培養,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)細胞用途:僅供使用。
細胞培養步驟
一. 培養基 及 培養 凍存 條件準備:
培養條件:貼壁生長時,選擇 DMEM-H 培養基(DMEM-H:GIBCO,添加 NaHCO3 1.5g/L, 添加 0.2 mM 脯氨酸,0.001 mM 氨甲蝶呤),90%;胎牛血清,10%。[MTX 是基因 DHFR 產物的抑制物。當培養基中存MTX 時,MTX 可滲入細胞內與 DHFR 蛋白結合,使核苷酸的合成受阻。但是 DHFR 基因連同其附近幾千 KB的 DNA 還會擴增以滿足核苷酸合成的需要。理論上 MTX 濃度越大,DHFR 基因擴增越多,與 DHFR 基因連鎖的目的蛋白基因也表達得越多]懸浮培養時,請使用懸浮生長培養基,培養基為:EX-CELL CD-CHO CHOSerum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich)添加物:L- 谷氨酰胺(Sigma-Aldrich)Anti-Clumping Agent(Gibco)備注 :CD-CHO CHO Serum-free Medium 請按照培養基配制說明書配制,L-谷氨酰胺配制濃度為 200mM,工作濃度為 8mM(即稀釋 25 倍,如 500ml CHOSerumfreeMedium中添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺,抗結團劑使用為 1%,即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗結團劑)
1)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37 攝氏度,培養箱濕度為 70%-80%。
2)凍存液:90%*培養基(貼壁生長凍存時)或 90%懸浮培養基(懸浮生時),10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞 處理 :
1) 復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養(或將細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約 1ml 含血清的培養基后加入凍存管中,再添加 10%DMSO 后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM 條件下離心 4 分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入 10%DMSO 后進行凍存。
中國倉鼠卵巢細胞(CTLA4 Ig-24)注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們電聯。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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