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酶聯生物免疫學檢驗的各領域中的ELISA試劑盒，有著靈敏度高、特異性強、經濟性較好等優點，酶聯生物的ELISA試劑盒在所有產品中銷量是高的，本公司ELISA試劑盒僅用于科研，不用于臨床。在實驗過程中肯定會有很多科研朋友是不懂的，今天就給大家介紹一下ELISA試劑盒的使用方法。

一：實驗操作程序簡述

1. 準備試劑，樣品和標準品；

2. 加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘；

3. 洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應10分鐘；

4. 加入終止液；

5. 15分鐘之內度OD值；

二：包被的條件

包被用抗原或抗體的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。ELISA試劑盒抗體和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。

通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置放置一個晚上，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。

三：競爭法測抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

四：抗原和抗體

制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG，以免在與酶聯結時其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體，這樣全部酶結合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進行反應，實驗結果本底淺淡。如用F(ab')2進行標記，則更可避免標本中RF的干擾。

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