產品時間:2019-04-11
小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)公司一直腳踏實地,深耕市場,洞察廣大消費者的需求,為消費者提供高品質產品而努力,一切從客戶需求出發,為客戶需求打造專業的細胞產品,是我司能一直跑在市場前沿的秘訣所在,為回饋客戶,特展開8折優惠溫暖沖擊波活動,盡情享受吧!
小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)
細胞介紹
與原始的隨機交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一樣,NIH/3T3,是從MH Swiss小鼠胚胎培養物中建立的高度接觸抑制的連續細胞株。為了培育在形態學 特征上更適合于進行轉化分析的亞株,建立的MH/3T3細胞株又進行了五輪以上亞克隆。這株細胞對DNA轉化及轉染研究十分有用。檢測表明肢骨發育畸形病 毒(鼠痘)陰性。
細胞特性
1)來源:胚胎
2)形態:成纖維細胞
3)含量:>lxl06個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基后轉移至l〇cm培養皿或者T25培養瓶中培養,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途:僅供使用。
小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備:
1. 準備DMEM培養基(DMEM,GIBCO),北美胎牛血清,15%,1% PS。
2. 培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理:
1.復蘇細胞:將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中 培養,補加培養基至6ml。
2.細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口 lm丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37°C培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2ml*培養基終止消化。
輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加l-2mL 培養液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻,按每lml的數量分配到凍存管中,注意凍存 管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)注意事項:
收到細胞后,若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們電聯。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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